- PCR (prueba) - ¿Qué es la técnica de PCR?
- PCR (prueba) - aplicación del método PCR
- PCR (prueba) y enfermedad de Lyme
- PCR - resultados. ¿Pueden ser falsos positivos?
- PCR - resultados. ¿Pueden ser falsos negativos
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PCR es una prueba que se ha utilizado en el diagnóstico de muchas enfermedades. El método PCR permite evidenciar la presencia directa de bacterias en el organismo, y en concreto su ADN. La PCR se utiliza, entre otras cosas, en en el diagnóstico de la enfermedad de Lyme. ¿Qué es la técnica PCR? ¿Qué es la PCR en tiempo real?
Contenido:
- PCR (prueba) - ¿Qué es la técnica de PCR?
- PCR (prueba) - aplicación del método PCR
- PCR (prueba) - Enfermedad de Lyme
- PCR (prueba) - resultados. ¿Pueden ser falsos positivos?
- PCR (prueba) - resultados. ¿Pueden ser falsos negativos
PCR(reacción en cadena de la polimerasa) es el método principal utilizado en laboratorios genéticos y moleculares. Fue desarrollado en 1983 por Kara Mullis, a quien se le otorgó el Premio Nobel en 1993.
PCR (prueba) - ¿Qué es la técnica de PCR?
Prueba de PCRconsiste en la amplificación múltiple (generalmente en 30-40 ciclos) de un fragmento específico de ADN, por ejemplo, genes que codifican proteínas de Borrelia, con el uso de la enzima polimerasa.
Luego, para visualizar el fragmento de ADN amplificado, se utilizan colorantes moleculares especiales. La PCR, gracias a la amplificación de fragmentos específicos de ADN, es un método ultrasensible.
En el método PCR, los fragmentos de ADN se amplifican utilizando pares de cebadores específicos para una región determinada del ADN bacteriano. Por ejemplo, las regiones diana de PCR utilizadas en el diagnóstico de la enfermedad de Lyme son genes que codifican proteínas, p. ADNr 16S, recA, fla, p66, OspA
El material biológico a partir del cual se puede realizar la prueba es:
- sangre
- sección de piel por eritema migratorio
- líquido cefalorraquídeo
- líquido sinovial o cartilaginoso
- orina
PCR (prueba) - aplicación del método PCR
Además del diagnóstico de la borreliosis de Lyme, el método PCR puede detectar fragmentos de ADN específicos de otros microorganismos o humanos. Por lo tanto, el método PCR también se utiliza en:
- diagnóstico y seguimiento de infecciones virales: virus del herpes (herpes virus, herpes zoster, Epstein-Barr, citomegalovirus), VIH, virus de la hepatitis (VHB y VHC)
- diagnóstico y seguimiento de infecciones bacterianas, especialmente aquellas bacterias,que no se pueden identificar a través de cultivos, por ejemplo, tuberculosis
- diagnóstico y seguimiento de enfermedades neoplásicas: leucemia, cáncer de mama, cáncer colorrectal, cáncer de pulmón
- diagnóstico de predisposición al cáncer: cáncer de mama y de ovario (genes BRCA1 y BRCA2), cáncer colorrectal (genes APC y CHEK2)
- diagnóstico de enfermedades genéticas: hemocromatosis (gen HFE), talasemia (genes HBA1 y HBA2), enfermedad celíaca (genes HLA)
- pruebas de paternidad, que detectan la compatibilidad del ADN del niño y el padre
Actualmente, hay muchas modificaciones al método PCR. Por ejemplo, en el diagnóstico de la enfermedad de Lyme, se utilizan principalmente los métodos de PCR anidada (PCR anidada) y PCR en tiempo real ( ). Este último es un método cuantitativo y permite determinar el número exacto de copias de ADN de Borrelia en el material biológico analizado.
PCR (prueba) y enfermedad de Lyme
La base para el diagnóstico de la enfermedad de Lyme son las pruebas serológicas. Sin embargo, hay situaciones clínicas que pueden causar que estas pruebas sean falsas negativas:
- ventana serológica, es decir, el período inicial de infección en el que el cuerpo aún no produce anticuerpos IgM e IgG específicos contra Borrelia
- en personas inmunocomprometidas que no producen suficientes anticuerpos
- presencia de inmunocomplejos que consisten en antígenos de Borrelia y anticuerpos específicos para ellos e impiden la detección de anticuerpos por métodos serológicos
Si se sospecha que el paciente tiene síntomas de la enfermedad de Lyme y los resultados de las pruebas serológicas son negativos, se puede realizar una prueba molecular basada en el método PCR.
El ADN de las espiroquetas de Borrelia se puede detectar en las primeras etapas de la infección, ya que la cantidad de espiroquetas en los fluidos corporales es entonces la más alta.
En el diagnóstico de la borreliosis de Lyme, se utilizan principalmente métodos serológicos como ELISA, pero en algunas situaciones clínicas son útiles las pruebas genéticas mediante el método PCR.
Cuanto mayor sea el tiempo desde la infección, menor será la probabilidad de detectar ADN bacteriano. Por lo tanto, en algunos casos, antes de realizar la prueba de PCR, las bacterias se cultivan en medios especiales durante 1 o 2 semanas y luego se realiza la prueba.
Este enfoque se utiliza en caso de sospecha de enfermedad de Lyme Lyme y líquido cefalorraquídeo extraído. En la fase tardía de la infección, es más adecuado realizar una prueba ELISA.
El método PCR no debe usarse en el diagnóstico de rutina de la enfermedad de Lyme debido a la f alta de estandarizaciónrelativa a la presencia de variedades de Borrelia burgdorferi en Polonia
Sin embargo, en el caso de dificultades en el diagnóstico (especialmente en la etapa temprana de la enfermedad), el resultado de la prueba PCR es útil en el proceso de diagnóstico.
Un resultado positivo de la prueba significa que se detectó la presencia de ADN de Borrelia burgdorferi y sus variantes en el material analizado, pero no explica si el organismo está activamente infectado. Por otro lado, un resultado negativo no excluye la presencia de bacterias en el cuerpo.
Algunos laboratorios ofrecen pruebas para detectar la presencia de ADN de Borrelia en la garrapata. Sin embargo, el resultado de dicha prueba no es la base para el diagnóstico de la enfermedad de Lyme en una persona mordida.
PCR - resultados. ¿Pueden ser falsos positivos?
La PCR es un método ultrasensible y al mismo tiempo muy sensible a la contaminación. Por lo tanto, es muy importante en las pruebas basadas en PCR seleccionar un control interno adecuado para descartar resultados falsos positivos.
La recopilación correcta de material para las pruebas, así como la experiencia y la fiabilidad del diagnosticador que realiza la prueba también son de importancia clave.
PCR - resultados. ¿Pueden ser falsos negativos
Como en cualquier prueba de laboratorio, también en el método PCR pueden aparecer falsos negativos. Aquí es crucial recolectar sangre para un anticoagulante apropiado, ya que algunos de ellos, como la heparina, pueden inhibir la reacción de PCR.
Recolectar material después de comenzar la terapia con antibióticos puede disminuir la eficiencia de la reacción de PCR y aumentar la probabilidad de resultados falsos negativos.
También debe recordarse que la bacteria Borrelia vive por un tiempo muy corto en la sangre y los fluidos corporales, porque gracias a receptores especiales penetran muy rápidamente en lugares "difíciles de alcanzar" del cuerpo.
Por lo tanto, en contraste con el diagnóstico de otros microorganismos, el número de espiroquetas de Borrelia en el material biológico es pequeño, a veces incluso en el límite de detección del método PCR. Esto también puede causar un falso negativo.
Referencias
- Dunaj J. et al.. La importancia del método PCR en el diagnóstico de la borreliosis de Lyme. Navegar Epidemiol. 2013, 67, 119 - 123.
- Diagnóstico de laboratorio de enfermedades transmitidas por garrapatas Recomendaciones del Grupo de Trabajo: Cámara Nacional de Diagnósticos de Laboratorio, Instituto Nacional de Salud Pública-Instituto Nacional de Higiene, Consultor Nacional en el campo de enfermedades infecciosas, Departamento de Enfermedades Infecciosas y Neuroinfecciones , Universidad Médica de Białystok, Sociedad Polaca de Virología, Varsovia 2014.
- Ružić-Sabljić E. y Cerar T. Avances en el diagnóstico molecular de la enfermedad de Lyme. Expert Rev Mol Diag. 202217 de enero (1): 19 a 30.
- Valones M.A.A. et al.. Principios y aplicaciones de la reacción en cadena de la polimerasa en campos de diagnóstico médico: una revisión. Braz J Microbiol. 2009 Ene-Mar; 40 (1): 1-11
Karolina Karabin, MD, PhD, bióloga molecular, diagnosticadora de laboratorio, Cambridge Diagnostics PolskaBióloga de profesión, especializada en microbiología, y diagnosticadora de laboratorio con más de 10 años de experiencia en labores de laboratorio. Graduado de la Facultad de Medicina Molecular y miembro de la Sociedad Polaca de Genética Humana Jefe de becas de investigación en el Laboratorio de Diagnóstico Molecular en el Departamento de Hematología, Oncología y Enfermedades Internas de la Universidad Médica de Varsovia. Defendió el título de doctora en ciencias médicas en el campo de la biología médica en la 1ª Facultad de Medicina de la Universidad Médica de Varsovia. Autor de numerosos trabajos científicos y de divulgación científica en el campo del diagnóstico de laboratorio, la biología molecular y la nutrición. Diariamente, como especialista en el campo del diagnóstico de laboratorio, dirige el departamento de contenido de Cambridge Diagnostics Polska y coopera con un equipo de nutricionistas en la CD Dietary Clinic. Comparte su conocimiento práctico sobre diagnóstico y dietoterapia de enfermedades con especialistas en conferencias, sesiones de capacitación y en revistas y sitios web. Está particularmente interesada en la influencia del estilo de vida moderno en los procesos moleculares del cuerpo.